DNA pull down

背景说明DNApulldown以感兴趣的DNA序列为中心，寻找与该序列结合的蛋白质，比较常见的应用是寻找某特定基因启动子的转录因子。启动子通常位于结构基因5"端上游，含有RNA聚合酶特异性结合和转录起始所需的保守序列。转录因子也称反式作用因子，是一种DNA结合蛋白，它能与真核基因的顺式作用元件（如启动子、增强子等）特异性结合来激活或抑制基因表达。转录因子有4个主要结构域：DNA结合域决定转录因子的特异性，转录调控域（包括激活域或抑制域）决定转录因子的功能，寡聚化位点使不同转录因子间发生相互作用，核定位信号控制转录因子进入细胞核。一个基因的启动子通常会结合多种转录因子，寻找启动子的特异转录因子，有助于我们理解这些启动子下游的功能基因是如何被调控的。▼应用场景DNApulldown用于研究DNA结合蛋白和特定的DNA序列的相互作用。▼实验原理DNApulldown是一种研究DNA与蛋白互作的方法。其原理是：生物素标记的DNA片段结合在链霉亲和素磁珠上，再与核蛋白孵育，从而捕获并纯化出与DNA片段互作的蛋白。捕获的蛋白一方面可以通过Westernblot验证某一特定蛋白是否与靶DNA片段结合；另一方面也可以进行质谱鉴定，筛选出与DNA片段可能互作的蛋白质。▼我们的优势1.表达蛋白时有自研改造的适合不同蛋白表达的标签载体，确保表达出可溶性蛋白；2.原核表达对培养基、温度、ph、时间、分子伴侣等进行优化组合，确保可溶性蛋白产量；3.添加各种裂解液和蛋白酶抑制剂的超声破碎缓冲液，确保蛋白产量；4.自研的超滤缓冲液配方，保护蛋白且不影响蛋白和DNA结合；5.Thermo原装试剂标记探针，保证标记效率；6.自研的洗杂液配方，确保非特异结合蛋白的流出7.自研的洗脱液配方，确保生物素探针的完全洗脱8.自研封闭液和洗涤液，降低实验背景。