染色质免疫共沉淀

实验原理及目的染色质免疫共沉淀(ChromatinImmunoprecipitation,ChIP)是目前研究体内DNA与蛋白质相互作用最为主要的方法之一。本实验的原理是在活细胞状态下通过化学交联剂将蛋白质－DNA复合物固定，并将其随机打断成一定长度范围内的染色质小片段，然后通过免疫学的方法沉淀出目的蛋白质－DNA复合体，从而特异性地富集与目的蛋白相结合的DNA片段。通过对目的DNA片断的纯化与检测，最终获得蛋白质与DNA相互作用的信息。染色质免疫共沉淀技术广泛的应用于表观遗传（组蛋白等）分析，转录因子结合位点分析等蛋白质与DNA结合的试验分析中。随着第二代测序技术的逐步完善和成熟，染色质免疫共沉淀结合第二代高通量测序技术（ChIP-seq）正逐步成为基因调控网络研究中一种非常有效的研究手段。实验步骤A］实验材料的交联处理（室温）：B］实验材料的染色质抽提（4度）：C］染色质的超声波片段化（4度）：D］染色质前处理和免疫共沉淀（4度）：孵育抗体和磁珠染色质的预处理免疫沉淀E］洗脱蛋白质-DNA复合物并释放DNA（4度）：F］纯化DNA（室温）：G］对ChIPDNA进行定量：结果分析：%Input=2(CtInput-CtChIP)×Fd×100%；FoldEnrichment=[%(ChIP/Input)]/[%(Negativecontrol/Input)]服务周期20个工作日材料条件实验材料：ChIP级抗体，5ug/样本；细胞：大于107；动物组织：大于0.1g/样本；植物组织：5g/样本。交付结果实验报告（实验仪器设备、试剂、实验方法、数据分析结果）；

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