拟南芥原生质体亚细胞定位 一、实验原理: 将目标蛋白基因与荧光蛋白的N端或C端融合,通过瞬时转染技术,西安淳风生物科技有限公司,西安淳风生物科技有限公司,使得该融合蛋白在受体细胞内表达,合肥亚细胞定位实验外包,贵阳医药、保养实验外包,合肥亚细胞定位实验外包,贵阳医药、保养公司,目标蛋白会牵引荧光蛋白一起定位到目标细胞器中,通过观察荧光蛋白在细胞内显示的位置,确定目标蛋白的位置,从而确定目标蛋白的亚细胞定位情况。二、实验步骤: 1、去内毒素质粒提取 2、亚细胞定位实验 (一)准备拟南芥幼苗 (二)拟南芥原生质体的制备 (三)PEG转化(室温操作) 三、实验结果: 激光共聚焦拍照。 烟草亚细胞定位 一、实验原理: 利用农杆菌将外源基因导入到烟草叶片中进行表达,进行蛋白的亚细胞定位实验。 二、实验步骤: 1.农杆菌培养 2.本生烟草(Nicotiana benthamiana)注射农杆菌菌液 3.取样,合肥亚细胞定位实验外包,西北医药、保养技术服务,激光共聚焦拍照。
亚细胞定位是指某种蛋白或表达产物在细胞内的具体存在部位。例如在核内、胞质内或者细胞膜上存在。GFP是绿色荧光蛋白,在扫描共聚焦显微镜的激光照射下会发出绿色荧光,从而可以精确地定位蛋白质的位置。例如在核内、胞质内或者细胞膜上存在。GFP是绿色荧光蛋白,在扫描共聚焦显微镜的激光照射下会发出绿色荧光,从而可以精确地定位蛋白质的位置。
GFP,实际是给你要研究的物质加上标记,在此相当于报告蛋白的作用。使用GFP必须构建融合蛋白载体,并在转染之后有效表达。这样,若在荧光显微镜下看到细胞内某一部位存在GFP信号,说明和GFP融合的蛋白也存在于该部位,这样就达到了确定某物质亚细胞定位的目的。