需要280nm和260nm波长处的CF值来确定抗体等生物分子的标记程度(DOL),并用于校正染料偶联物中相应荧光染料的吸收分数!在蛋白质标记的情况下,校正因子CF280用于寡核苷酸CF的标记260!如何选择正确的标签为了获得尽可能好的结果,必须考虑几个因素!首先是激发源:为了减少样品自发荧光引起的干扰优选550nm以上或者甚至600nm以上的激发波长!除了减少红色光谱区域在与活细胞一起工作时也是有利的,因为减少了损坏!
由于生物分子和荧光染料具有碱性(-NH2)或酸性(-COOH,-SO3H)取代基,质量和电荷都取决于pH值!表中的数字基于氨基(-NH2)非质子化,酸基团(-COOH,-SO3H)去质子化,硫醇基团(-SH)呈中性!这对应于pH值几乎中性(pH6-8)的水溶液!应该注意的是,在更酸性的条件下(pH4),荧光染料ATTO565和ATTO590中额外的羧酸基团被质子化,因此质量和电荷比表中所示的要高1。
通过不断重新设计新衍生产品–例如用于“点击化学”或染料偶联磷脂的化合物-市场地位进一步巩固!在早期,通过参与各种BMBF和欧盟项目,也获得了以应用为导向的染料开发的重要推动力.经过近20年的发展,ATTO-TECGmbH现在拥有40多种荧光基团产品组合,具有200多种不同的修饰。这些荧光标记物(其中一些已获得专利)涵盖了从紫外线到近红外的整个可见光谱范围!我们的客户-包括有名研究机构和国际公司-欣赏ATTO染料的特别高纯度和高品质。
下表概述了一些常用的激励源和推荐的ATTO标签.如今,紧凑而强大的激光二极管正在覆盖整个可见光和近红外区域光谱的红外部分!他们进入了许多应用程序/设备非常有效的激发源和越来越多的替代经典光源!如果没有与波长完全匹配的吸收大值的标签对于激发源,应选择波长稍长的标签!这个吸光度会更小,但激发波长和荧光光谱始终与激发波长无关,具有具有更好地辨别散射激发光的优点。ATTO染料标记的磷脂生物膜如质膜、细胞内膜,还有人造脂质膜在研究和科学中都非常感兴趣.
正宗atto-tec
该链路已在许多应用中得到证明。但是,如果您的应用需要不同的链接器长度,如果您希望链接刚性或具有其他特殊属性,请告诉我们!官能团和偶联物:NHS酯和马来酰亚胺是分别用于将染料偶联到氨基和硫醇基团的常用官能团!然而,具有其他官能团的底物需要具有完全不同的反应基团的标记.因此,ATTO-TEC提供具有氨基,酰肼基团和生物素的染料标记物,用于与生物分子偶联!此外,叠氮化物和炔烃可用于“点击化学”等等。这些衍生物通常列在所需的染料下!
这些性质可能与染料作为标签的适用性高度相关。重要的是,染料在辐照过程中必须保持完整.许多常见标签,例如!荧光素衍生物FITC显示出非常低的光稳定性.因此灵敏度和如果使用高强度激光激发并且工艺以便长时间观察.这是显微镜的严重倒退以及基于共焦原理的其他技术,例如单细胞检测应用程序!与一些广泛使用的旧染料形成对比许多常见的荧光标记即使在没有任何照射的情况下(即在黑暗中)也会劣化,尤其是当暴露在实验室中存在的低浓度臭氧中时气氛在臭氧暴露的相同条件下,染料ATTO647N和ATTO655比菁染料Cy5TM和Alexa647TM!
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ATTO的荧光染料可用于标记多种生物分子,如蛋白质、核苷酸等!ATTO的荧光标记是各种生物分析应用的理想选择!一些染料的吸收和荧光已针对可见光谱的红色部分进行了专门优化。在此波长范围内,许多生物样品的自发荧光大大降低,因此与底物相比,标记荧光具有更好的可检测性!其他染料显示出相对于吸收的荧光大偏移(较大的斯托克斯偏移)!还有一些特征是亲水性强,可减少或完全避免对生物分子和表面的非特异性吸附!ATTO标记可以在荧光光谱中以多种方式使用.