需要280nm和260nm波长处的CF值来确定抗体等生物分子的标记程度（DOL），并用于校正染料偶联物中相应荧光染料的吸收分数！在蛋白质标记的情况下，校正因子CF280用于寡核苷酸CF的标记260.如何选择正确的标签为了获得尽可能好的结果，必须考虑几个因素!首先是激发源：为了减少样品自发荧光引起的干扰优选550nm以上或者甚至600nm以上的激发波长！除了减少红色光谱区域在与活细胞一起工作时也是有利的，因为减少了损坏.
这些性质可能与染料作为标签的适用性高度相关！重要的是，染料在辐照过程中必须保持完整！许多常见标签，例如!荧光素衍生物FITC显示出非常低的光稳定性！因此灵敏度和如果使用高强度激光激发并且工艺以便长时间观察。这是显微镜的严重倒退以及基于共焦原理的其他技术，例如单细胞检测应用程序。与一些广泛使用的旧染料形成对比许多常见的荧光标记即使在没有任何照射的情况下（即在黑暗中）也会劣化，尤其是当暴露在实验室中存在的低浓度臭氧中时气氛在臭氧暴露的相同条件下，染料ATTO647N和ATTO655比菁染料Cy5TM和Alexa647TM!
其次，标签应在激发波长下显示出强吸收，以及高荧光量zi产率.消光系数与荧光的乘积量zi产率通常被称为染料的“亮度”！染料的荧光效率在染料的蓝色和绿色的区域高谱在某些情况下，量zi产率几乎达到一百%.朝向更长的波长，发射效率急剧下降特别是在水溶液中!然而，ATTO-TEC已经能够开发标签即使在650nm左右也显示出高量zi产率.例如：ATTO647N（第56页）在水溶液中的荧光强度是较老的菁染料Cy5TM的两倍!
下表概述了一些常用的激励源和推荐的ATTO标签!如今，紧凑而强大的激光二极管正在覆盖整个可见光和近红外区域光谱的红外部分！他们进入了许多应用程序/设备非常有效的激发源和越来越多的替代经典光源。如果没有与波长完全匹配的吸收大值的标签对于激发源，应选择波长稍长的标签.这个吸光度会更小，但激发波长和荧光光谱始终与激发波长无关，具有具有更好地辨别散射激发光的优点!ATTO染料标记的磷脂生物膜如质膜、细胞内膜，还有人造脂质膜在研究和科学中都非常感兴趣.
如果在那里找不到特定的染料衍生物，通常可以为您生产。荧光分子发出的光，即所谓的荧光，已经为人们所知超过一百六十年.由于多功能光源的发展（激光等）和准确的探测器，荧光光谱已经成为一种强大的具有高灵敏度的工具.如今，即使是单个分子也可以通过新颖、复杂的荧光技术！这种方法的巨大潜力在于2014年因发明超分辨荧光显微镜而获得诺贝尔化学奖。大多数感兴趣的分子，例如在生物化学中，不显示其荧光拥有然而，它们可以用荧光染料进行化学连接，即标记。
优势atto-tec
标签的发射光谱应与所应用的过滤器组.反过来，滤波器组的选择必须使其能够阻挡激发光被样品散射但尽可能有效地透射荧光！例如，当使用波长为635nm的二极管激光器作为激励源时ATTO647N的滤光片组具有650nm和750nm之间的高透射率是一个非常好的选择!从该目录中的ATTO标签列表中可以看出，ATTO647N在635nm处具有高消光系数，该波长接近吸收曲线的大值，以及优异的荧光量zi产率（hfl=65%）。
然而，对于大多数ATTO染料来说，这种影响非常小。此外，荧光染料的光学性质取决于衍生物（羧基，NHS酯等）！例如，与染料酸（羧基）相比，染料马来酰亚胺的荧光量zi产率和荧光寿命显着降低.然而，这并不重要，因为在染料马来酰亚胺与生物分子（例如蛋白质）偶联后，荧光会恢复.该表包含常用的衍生物的分子量（MW），分别用于偶联氨基和硫醇基团的NHS酯和马来酰亚胺！分子量包括反离子.为了协助生物分子-染料偶联物的MS分析，还给出了偶联后每种ATTO染料的相应质量和电荷增加!
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