原代细胞转染试剂_RNAiMAX转染生物化工的作用

　　转染的类型根据导入的核酸存在于宿主细胞的时间长短，可以分为瞬转和稳转!根据转染方式可以分为化学方法，生物方法，物理方法！瞬时转染是指将构建好的质粒或者siRNA通过某种方式导入到哺乳动物细胞内（常用的工具细胞HEK293细胞），该外源核酸片段不整合到细胞自身的基因组上。随着细胞的生长分（fen）裂，外源基因会逐渐丢失，在细胞内能够存在3-4天，无法随着细胞的分（fen）裂进入到子代细胞中。在这一段时间内，外源基因在细胞内发生转录翻译，得到少量的蛋白!

　　转染效率高，适用细胞种类多，可转染质粒DNA、siRNA和小动物活体转染!物理转染方法电穿孔利用高脉冲电压破坏细胞膜电位，使得DNA通过膜上形成的小孔导入稳定/瞬时性转染适用所有细胞类型；适用瞬时转染和稳定转染；不需要载体需要一定的电转设备；需要优化电转脉冲和电压参数；细胞致死率高；DNA和细胞用量大显微注射利用管尖极细（0!1至0!5μm）的玻璃微量注射针，将外源基因片段直接注射到原核期胚或培养的细胞中适用所有细胞类型；可进行单细胞转染；不需要载体；不限制转入的基因大小和数量；多用于转基因设备昂贵；技术要求高；细胞致死率高生物转染方法病毒转染病毒该载体可以将外源基因有效地整合到宿主染色体上，从而达到持久性表达转染效率高；适用于难转染的细胞系；可用于体内转染周期长，程序复杂；费用相对高；存在生物安全问题转染方式考虑到转染效率是影响细胞实验的重要因素，因此选择合适的转染试剂和转染方式很关键.

　　稳定转染的特点是能够得到蛋白的大量、长期生产，满足后续的一系列体内体外的表型实验.新型小分子多肽材料转染法进入细胞后可以被代谢的新型小分子多肽转染试剂，对细胞无毒性，不易出现细胞死亡，不激活细胞免疫机制!ZetaLife转染试剂采用的是新型小分子多肽材料，其特点是非脂质体材料，大小是80nm左右，由于形状是圆形的，不会对细胞有物理性损伤，材料表面有特异性结合接头，只特异性识别DNA、RNA，对血清成分（如细胞因子、蛋白、内毒素等）不识别也不结合；特异性接头与核酸形成转染复合物，转染复合物通过细胞主动吞噬进入细胞，进入细胞后可以被代谢的新型小分子多肽材料，对细胞无内毒素影响，不易出现细胞死亡.

　　根据使用的载体不同，收集目的基因/蛋白进行检测的时间不同，通常在转染后48h，目的蛋白的表达水平（zui）高！瞬时转染的特点是短时间内进行蛋白的小量制备，满足后续的实验要求。稳定转染是外源DNA整合到细胞基因组中，成为细胞基因组的一部分从而得以复制，随着细胞分（fen）裂，子代细胞也同样表达外源基因，这就是稳定转染细胞的标志.稳定转染是建立在瞬时转染的基础上的，先对细胞进行转染，再对得到的细胞池进行筛选，筛选标记是抗生素，荧光报告基团等，通常需要2-3周的筛选时间，由此形成稳定转染的细胞系！

原代细胞转染试剂

　　转染(transfection)是真核细胞主动或被动导入外源核酸片段（DNA或RNA）而获得新的表型的过程!转染后的细胞会产生重组蛋白，或者特异性的增强/抑制细胞中的基因表达。转染后的检测主要包括基因水平和蛋白水平的检测！一定时间后收集转染处理后的细胞，采用超声或酶解的方法破碎细胞，离心得到上清!针对基因水平，使用普通PCR或RT-PCR进行验证，蛋白水平，使用westernblot检测，简单，快速，准确!

　　下面我们介绍一下常见的转染方式.细胞由带负电荷的磷脂双分子层构成，对于也带负电荷的核酸片段（DNA和RNA）来说是不可透过的屏障，因此研究人员开发了很多方法能使核酸穿透细胞膜进入胞内，大致分为三类：化学转染方法阳离子脂质体脂质体是一种人工的脂双层膜!阳离子脂质体通常由阳离子和两性离子脂质组成.在DNA与脂质体形成lipoplex的过程中，阳离子脂质体起到复合和凝集DNA的作用，同时也有助于复合物与细胞膜的结合操作简单快速；转染效率高且重复性好；可用于转染DNA、RNA和蛋白；可用于瞬时转染和稳定转染会受到血清的抑制，降低转染效率；脂质体中的核心组分对细胞毒性较大磷酸钙共沉淀核酸以磷酸钙-DNA共沉淀物的形式出现时，可使DNA附在细胞表面，利于细胞吞入摄取，或通过细胞膜脂相收缩时裂开的空隙进入细胞内便宜，使用广泛转染效率差，不稳定；细胞毒性大；葡聚糖它是一种阳离子聚合物，可以与带负电荷的DNA和蛋白质结合，进而被细胞吞噬多用于贴壁细胞一些细胞类型对葡聚糖特别敏感，可能会发生形态变化或者抑制细胞生长其他阳离子聚合物带正电的聚合物与核酸带负电的磷酸基团形成带正电的复合物后与细胞表面带负电的蛋白多糖相互作用，并通过内吞作用进入细胞。