2预电泳:将聚合好的凝胶安置于电泳槽中,小心拔去梳子,加入电泳缓冲液后低电压10-20V的预电泳20-30min.(目的是清除凝胶内的杂质,疏通凝胶孔径以保证电泳过程中电泳的畅通)。3样品准备:首先计算上样体积,然后按样品:上样buffer=4:1的比例加入上样bufer混匀,沸水10分钟,冰上5分钟。4加样:预电泳后依次加入标准品(Marker)和待分析样品。(加样时间要尽量短,以免样品扩散,可在未加样的孔中加入等量的样品缓冲液避免边缘效应!
再分别以0、1120ul将蛋白标准液加入96孔板的1~8标准孔中,在其他样品孔中加入10ul待测样品。分别加PBS定容至20ul。各孔中加入200ulBCA工作液,室温放置2小时!用酶标仪测定蛋白浓度:测定A562,依标准曲线算出蛋白浓度.牛血清白蛋白(BSA)在缓冲液中作用:BSA是酶的稳定剂,防止酶的分解和非特异性吸附;BSA能减轻有些酶的变性,能减轻有些不利环境因素如加热,表面张力及化学因素引起的变性的,可能是因为它结构中有17个二硫键,和一个巯基,巯基的化学反应很活泼,二硫键有抗氧化还原的作用,因此可与多种阳离子,阴离子和小分子结合;BSA能防止酶吸附到管壁而损失。
多肽血小板促生长因子能促细胞分裂,是多肽家庭的主要成员之一,是主要的促细胞增殖因子;成纤维细胞生长因子、表皮细胞生长因子、神经细胞生长因子等,血清中含量虽很少,但对细胞生长也有一定作用!激素激素对细胞的作用是多方面的!胰岛素:促进细胞摄取葡萄糖和氨基酸,与促细胞分裂有关。类胰岛素生长因子:能与细胞表达的胰岛素受体结合,从而有胰岛素同样的作用.促生长激素:促细胞增殖效应.其他成份氨基酸、葡萄糖、酮酸等对多种营养成分的合成培养基意义不大!
每个泳道加5ul!5电泳:加样完毕,选择80V恒压进行电泳,电泳直至溴酚蓝染料前沿到达两胶交界处(一般约20分钟),更换至100V恒压电泳,电泳直至溴酚蓝染料前沿下至凝胶末端处,即停止电泳(一般约为1小时20分钟)。主要成份:蛋白质是牛血清中主要成份!除包括可携带金属离子、脂肪酸和自身是激素类蛋白外主要还有白蛋白,球蛋白。纤维粘连素细胞促进细胞附着;α2巨球蛋白抑制胰蛋白酶的作用;胎牛血清中含胎球蛋白促细胞附着;转铁蛋白能结合铁离子,减少其毒性和被细胞利用。
干细胞级牛血清白蛋白
155总蛋白含量双缩脲法检测≥95%6总蛋白中BSA纯度电泳法检测≥98%7重金属含量≤10ppm贮存及稳定性:本品贮存于2-8度,保质期:2年牛血清白蛋白(BSA),是牛血清中的一种球蛋白,包含607个氨基酸残基,分子量为6446KDa,等电点为7!牛血清白蛋白在生化实验中有广泛的应用!测定蛋白浓度按50:1配置BCA工作液.10ulC液(蛋白标准)+90ulPBS液稀释成0!5mg/ml的蛋白标准液.