DNA纯化DNA纯化的目的在于去除不想要的DNA片段!由于磁珠优先吸附大片段,因而可通过一定比例的磁珠吸附特定大小以上的片段,丢弃上清中的非目标片段,之后将磁珠吸附的目的DNA洗脱回收。常用于小片段如接头二聚体/引物二聚体的去除.此外还有一些客户会用于样本的富集.DNA样本经磁珠纯化后会有部分样本的损失,磁珠回收效率可评估磁珠的回收能力。通常可通过计算得出:回收效率=(纯化后的DNA质量/InputDNA质量)。
经该磁珠纯化得到的产物可直接用于测序、PCR模板、酶切等下游分子实验.南京瑞贝西生物科技有限公司是一家集研发、生产和销售为一体的高新生物技术企业,目前座落于南京市江北新区,公司拥有8项发明专利,十余项实用新型专利,于2021年被评为高新技术企业。瑞贝西生物聚焦于核酸提取磁珠的制造和应用,已推出几十种核酸提取磁珠,公司将持续研发视为公司大核心竞争力,本着集俊成州的理念,汇聚了有机合成、高分子材料和分子生物学的专家团队,并与国内外的**学术机构开展价值合作,不断为客户创造*具价值的产品和服务!
基因测序越来越得到临床的认可,尤其是医疗概念提出以后,更是备受青睐,为治疗解答很多未知的问题!高通量测序技术的跨越式发展,使测序能力大幅上升,整个NGS工作流程中,测序文库的纯化与筛选亦尤为重要.今天,我们就聊一聊核酸纯化分选小能手——磁珠!分选纯化磁珠、产物纯化磁珠、DNA纯化磁珠、RNA纯化磁珠适用DNA片段的纯化,可简单、快速回收低至50bp的DNA片段,并且可以有效去除引物二聚体、dNTP、无机盐及蛋白质等杂质.
高品质RNA纯化磁珠
当PEG和NaCl被去除之后,加入水性分子,会快速充分水化DNA,解除三者间的离子作用,使得吸附到磁珠的DNA被纯化出来.此外,不同长度的DNA随PEG分子量、浓度以及盐浓度的不同,可以被选择性的沉淀出来.分选纯化磁珠、产物纯化磁珠、DNA纯化磁珠、RNA纯化磁珠适用DNA片段的纯化,可简单、快速回收低至50bp的DNA片段,并且可以有效去除引物二聚体、dNTP、无机盐及蛋白质等杂质!经该磁珠纯化得到的产物可直接用于测序、PCR模板、酶切等下游分子实验!
1979年Vogelstein等报道在高浓度dian化钠存在下玻璃粉末作为吸附剂用于从琼脂糖凝胶中提取DNA片段,而后基于硅胶和其他具有亲水性表面的载体的固相核酸纯化技术广泛发展起来.在整个体系中,影响DNA回收的因素包括聚乙二醇(PEG)、DNA大小和浓度、孵育时间等,其中PEG是影响DNA回收的决定性因素。DNA在较高浓度的PEG和NaCl中脱去分子水化层,分子构象由线状被压缩成卷曲球状,并暴露出大量带负电荷的磷酸基团,带负电荷的磷酸基团与羧基在Na的作用下形成“电桥”,使DNA被特异吸附到磁珠表面。
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一般以Agilent2100仪器检测。在特定磁珠比例(0.45×/0!15×)条件下,不同样本分选后片段分布范围集中在同一位置。较好的分选效果应该是顶部窄而圆润的独峰!此外不同厂家由于buffer的不同在特定磁珠比例条件下分布也会有一定的差异,使用前需根据各厂家相应的说明书确认目标片段的分选比例。欢迎来电咨询!欢迎合作.期待与您的合作!祝贵司商祺。磁珠的发明构想初来自于挪威科技大学的化学家JohnUgelstad,1976年他以聚苯乙_烯为主要材料,制造出均匀磁化的球体粒子。
DNA双轮分选(片筛)由于二代测序段短读长的局限性,所以最终的NGS文库需满足一定的长度要求!片筛的目的在于从片段化DNA中选择特定区域的DNA片段,以满足上机需求!比如将样本中的片段分布比作下图中的正态分布,由于磁珠优先吸附大片段,所以第—轮磁珠吸附目的片段以上的大片段,此时弃磁珠留上清(目的片段在上清中)。第二轮磁珠吸附目的片段,此时弃上清,再将磁珠上的目的片段洗脱回收。分选精度则是评估不同的磁珠投入比例分选得到的片段大小。