基本原理在验证植物蛋白互作时，荧光素酶互补实验(LuciferaseComplementationAssay,LCA)因其高灵敏度、可定量化、操作简单高效被广泛应用于植物学和动物学蛋白质互作研究目前,应用广泛的荧火素酶基因来源于北美萤火虫(fireflyluciferase),该基因编码550个氨基酸组成的荧火素酶蛋白(大小为62kDa)。实验中,荧光素酶蛋白被切成N端和C端2个功能片段,即NLuc(2–416AA)和CLuc(398–550AA)！
因为本实验为验证实验，注射前需将组合农杆菌进行混合。注射后72小时，取样通过荧光素酶检测试剂盒检测荧光信号.试剂:原生质体转化相关试剂（参阅拟南芥或者水稻原生质体转化相关章节）萤火虫荧光素酶底物（Promega,LuciferaseAssaySystem）实验过程将含有融合蛋白的植物表达载体转化农杆菌(Agrobacterium)后注射烟草叶片.24–48小时后，加入反应底物荧火素,利用植物活体分子影像系统(CCDimagingsystem)或luminometer来定性定量检测荧光强度,以判定目标蛋白之间是否存在相互作用及互作的程度!
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操作步骤：载体构建：将两个蛋白质分别与M-NLUC和M-CLUC融合连接。抽提质粒.农杆菌转化！侵染烟草，测量发出荧光的信号值并拍照，计算荧光素酶相对活性，判断蛋白质之间是否互作。实验原理：来自萤火虫的荧光素酶可以分成N和C两段蛋白质而没有酶活，将N和C端各融合另外的两个蛋白质，如果这两个蛋白质在体内可以互作的话，那么荧光素的N和C端将在空间上靠近而恢复酶活，因此可以通过检测分段的荧光素酶可否恢复酶活而判断两个蛋白质之间在体内是否存在相互作用!
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Here,wedescribeaprotocolthatincludestwoalternativedatacollectionmethodstoqualitativeandquantitativeanalyseluminescenceorluminousintensitytodetectprotein-proteininteractionsinplantcells。原理利用农杆菌将外源基因导入烟草叶片中进行表达，可以借此进行蛋白的亚细胞定位、蛋白互作和蛋白纯化等实验操作.
另外加入2ul100mM的乙酰丁香酮和100ul0！5MMES，28度摇床培养OD值约0左右！4000rpm常温离心10min，15分钟收集菌体。用含10mMMgCl2重悬菌体至OD值为0，以每毫升菌液加入2ul100mMAS，静置3小时以上.取正处于生长期的烟草叶片，使用针头在叶片反面扎些小孔!将侵染液装入5ml注射器内，用拇指按压注射器反板将液体从叶片下表皮注射到烟草叶片内.注射后，烟草叶片会出现湿润的现象！ 不论是从技术上还是从经济上看，超声波测量仪器都是流量测量的理想选择。通过多光束和数字信号处理，超声波测量仪可以实现很高的测量精确度。与传统的涡轮式仪表不同，它没有移动的元件，因此几乎不需要维修。而且，它也不会阻挡或者减慢管道中气体或者液体的流动。它能够准确地测量液态石油气产品的宽频，而不需像机械型技术那样得到验证。高灵敏度使其可以检测到管道中的任何泄漏，并可以测量和补充各种会影响监护运输领域中的测量准确度的变量。
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