细胞增殖及毒性检测CCK试剂盒——CCK8包装规格货号:K009-100、K009-500、K009-1000、K009-3000规格:100T、500T、1000T、3000T储存条件:4℃避光保存,有效期一年.产品说明CellCountingKit简称CCK试剂盒,为MTT法的替代方法,是一种基于WST(水溶性四唑盐,化学名:2-(2-甲氧基-4-硝苯(ben)基)-3-(4-硝苯(ben)基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑单钠盐)的广泛应用于细胞增殖和细胞毒性的快速高灵敏度检测试剂盒。
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CCK8试剂盒
)Ⅱ、细胞活性检测在96孔板中接种细胞悬液(100μL/孔)!将培养板放在培养箱中预培养(在37℃,5%CO2的条件下)。向每孔加入10μL的CCK溶液(注意不要在孔中生成气泡,它们会影响OD值的读数)!将培养板在培养箱内孵育1-4小时。用酶标仪测定在450nm处的吸光度!如果暂时不测定OD值,打算以后测定的话,可以向每孔中加入10μL0!1M的HCL溶液或者1%w/vSDS溶液,并遮盖培养板避光保存在室温条件下!
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如果暂时不测定OD值,打算以后测定的话,可以向每孔中加入10μL0!1M的HCL溶液或者1%w/vSDS溶液,并遮盖培养板避光保存在室温条件下!在24小时内吸光度不会发生变化。注意:如果待测物质有氧化性或还原性的话,可在加CCK之前更换新鲜培养基(除去培养基,并用培养基洗涤细胞两次,然后加入新的培养基),去掉药物影响!当然药物影响比较小的情况下,可以不更换培养基,直接扣除培养基中加入药物后的空白吸收即可。
检测白细胞时的灵敏度相对较低,因此推荐接种量不低于2,500个/孔(100μL培养基).如果要使用24孔板或6孔板实验,请先计算每孔相应的接种量,并按照每孔培养基总体积的10%加入CCK溶液!⑤如果没有450nm的滤光片,可以使用吸光度在430-490nm之间的滤光片,但是450nm滤光片的检测灵敏度至高!⑥培养基中酚红的吸光度可以在计算时,通过扣除空白孔中本底的吸光度而消去,因此不会对检测造成影响!
CCK法与其它检测方法之间的比较:MTT法:形成的formazan的水溶性差,产品性状为粉末,使用方法为配成溶液后使用,检测灵敏度高,检测时间较长,检测波长为560-600nm,细胞毒性高,细胞形态完全消失,试剂稳定性一般,可以大批量样品检测,便捷程度一般!XTT法:形成的formazan的水溶性好,产品性状为2瓶溶液,使用方法为现配现用,检测灵敏度很高,检测时间较短,检测波长为420-480nm,细胞毒性很低,细胞形态不变,试剂稳定性较差,非常合适大批量样品检测,便捷程度便捷.
在24小时内吸光度不会发生变化!Ⅲ、细胞增值-毒性检测在96孔板中配置100μL的细胞悬液!将培养板在培养箱预培养24小时(在37℃,5%CO2的条件下).向培养板加入10μL不同浓度的待测物质!将培养板在培养箱孵育一段适当的时间(例如:124或48小时)。向每孔加入10μLCCK溶液(注意不要在孔中生成气泡,它们会影响OD值的读数)!将培养板在培养箱内孵育1-4小时.用酶标仪测定在450nm处的吸光度!