Opti-MEM™I减血清培养基货号:31985070无血清培养基和试剂被广泛的应用于培养哺乳动物和无脊椎动物细胞以制备单克隆抗体,病毒抗原和重组蛋白等!大多数的无血清培养基含有向细胞内转运离子的转铁蛋白和调节葡萄糖摄取量的胰岛素,以及一些蛋白质和清蛋白,纤维蛋白,胎球蛋白等,这些蛋白在细胞培养中发挥各种不同的功能,如提供细胞贴壁所需的基质,抗生物反应器剪切力,作为脂质和其他生长分化因子的载体等!无血清培养基是不需要添加血清就可以维持细胞在体外较长时间生长繁殖的合成培养基!
应用:无血清培养基和试剂被广泛的应用于培养哺乳动物和无脊动物细胞以制备单克隆抗体,病毒抗原和重组蛋白等.大多数的无血清产品含有向细胞内转运离子的转铁蛋白和调节葡萄糖摄取量的胰岛素,以及一些蛋白质如清蛋白,纤连蛋白,胎球蛋白等,这些蛋白在细胞培养中发挥各种不同功能,如吸附毒性化合物,抗生物反应器剪切力,提供细胞贴壁所需的基质,作为脂类和其他生长因子的载体等!为了使细胞适应无血清培养,关键的是使所培养细胞:处于对数生长中期90%活细胞率适应时以较高的起始细胞接种细胞适应无血清培养基的方法直接适应——细胞从添加血清的培养基转换到无血清培养基(SFM)中.
还推荐Opti-MEMI培养基与阳离子脂质体转染试剂(如Lipofectamine™试剂)配套使用!Opti-MEMI培养基可用于各种悬浮和贴壁的哺乳动物细胞,包括SpAE-CHO、BHK-2HEK和原代成纤维细胞!针对广泛的细胞培养应用,提供了多种组分的Opti-MEMI改良培养基!这种Opti-MEMI的改良方式如下:包含•L-谷氨酰胺•酚红Opti-MEMI培养基的使用Opti-MEMI减血清培养基是一种内含胰岛素、转铁蛋白、次黄嘌呤、胸苷和微量元素的培养基。
培养基
细胞转入无血清培养基培养要有一个适应过程,一般要逐步降低血清浓度,从10%减少到5%,3%,1%,直至无血清培养.在降低过程中要注意观察细胞形态是否发生变化,是否有部分细胞死亡,存活细胞是否还保持原有的功能和生物学特性等.在实验后这些细胞一般不再继续保留,很少有细胞能够长期培养于无血清培养基而不发生改变的!细胞转入无血清培养之前,要留有种子细胞,种子细胞按常规培养于含血清的培养基中,以保证细胞的特性不发生变化。
细胞培养适应替代血清:许多细胞利用连续适应方法能很好的适应,用包含FBS的的培养基和包含有替代血清的培养基1∶1(v∶v)的混合培养基培养细胞.通过下列的混合培养基的方式,连续几代减少当前培养基的量:1∶2,1∶4,1∶16和100Percent替代培养基!每次适应改变血清比例时,传代细胞2到3次。培养可以直接从FBS转换到替代血清。一开始就使用相同于FBS的浓度的替代物或血清,生长的延迟可能会发生,4允许进行2到3次的传代,使生长率恢复到以前的水平!
一些类型细胞可直接从包含血清的培养基适应无血清培养基!对于直接适应,接种细胞密度应该:5×10~5×10细胞/ml.当细胞密度达到1×10~3×10细胞/ml时,传代培养细胞。当细胞密度在培养4到7天后达到2×10~4×10细胞/ml时,细胞完全适应了无血清培养基.每隔3~5天,当细胞密度达到1×10~3×10细胞/ml,细胞活率在90%时,贮备的适应了无血清培养基的细胞培养物应该再次传代培养!连续适应——分好几步把细胞从添加血清的培养基转换到无血清培养基(SFM)中,与直接适应相比较,连续适应趋向对于细胞更加温和一些。
Opti-MEM™I减血清培养基货号:31985070无血清培养基的优点可避免血清批次间的质量变动,提高细胞培养和实验结果的重复性!避免血清对细胞的毒性作用和血清源性污染.避免血清组分对实验研究的影响!有利于体外培养细胞的分化!可提高产品的表达水平并使细胞产品易于纯化.缺点:细胞在无血清培养基中易受某些机械因素和化学因素的影响,培养基的保存和应用不如传统的合成培养基方便!成本较高!针对性很强,一种无血清培养基仅适合某一类细胞的培养!
l培养:将灌装制品按不同批号区分,同一批号不同板层的灌装制品也需分开放置(小批号样品一半正立放置、一半倒立放置),装入中转筐中,先置20-25℃培养7天,进行目检,将正立转成倒立,将倒立转成正立,将再置30-35℃培养7天;记录培养的起止时间,且灌装制品培养期间每两个小时至少记录一次培养温度至制品结束培养。在房间培养培养基样品,房间四个角和中央处均放置一个温度计,到达记录时间点后记录同一个房间内每个温度计显示的温度。将样品的培养观察结果记录试验批样品培养观察记录”中。