注意事项：质粒DNA必须溶解于无菌双蒸水或超纯水，但不能溶解于提取试剂盒提供的Buffer。溶解于Buffer的质粒转染效率会下降80%左右，甚至会转染失败！质粒必须去除内毒素，内毒素对细胞将产生很大的细胞毒性，会导致转染效率下降70%-80%左右，甚至导致转染失败（推荐使用Qiagen、TIANGEN、Omega去内毒素质粒提取试剂盒）!复合物的制备过程中是绝不能用其他任何试剂对核酸或转染试剂进行稀释，只需将核酸和转染试剂两者按1:1比例直接混合，如果进行了稀释会导致转染失!
转染试剂与核酸混匀后用移液器吹打10-15次，室温孵育10-15分钟后即可加入细胞培养板.转染24小时后进行正常换液，不能像Lipo2000一样转染4-6小时后换液!原代细胞、免疫细胞转染时，细胞基础培养基里面不能含有双抗培养基.难转染细胞高效率转染案例图赏：高效率转染N2a/Neuro-2a小鼠神经瘤母细胞高效率转染NK细胞高效率转染THP-1悬浮细胞高效率转染人淋巴悬浮细胞ZetaLifeAdvancedDNARNA转染试剂系列价格：品牌：美国ZetaLife货号：AD6000250!
杭州真核细胞转染试剂的选择
ZetaLife转染试剂可转染极度难转染的免疫细胞、悬浮细胞，如:T细胞、NK细胞、人淋巴细胞、THP-1等；可高效率转染siRNA到任何哺乳动物细胞;用于将DNA和siRNA转染到真核细胞系和各种原代细胞中！ZetaLife转染试剂突出表现：ZetaLife多肽小分子转染试剂的尺寸大小是传统脂质体转染试剂体积的1/10;本转染试剂是通过细胞内㖔和细胞主动吸收进入细胞；本转染试剂进入后对细胞膜无物理性损伤，不易出现细胞变形，保持高的细胞活力；不激活细胞表面或细胞体内marker;可反映真实的细胞通路蛋白原始数据；可转染免疫细胞、悬浮细胞等!
核酸复合物制备：将核酸与转染试剂按照1:1关系直接混合，用移液器吹吸10-15次混匀，室温静止10-15分钟。在细胞培养基中加入核酸复合物：根据参考用量在细胞中加入核酸复合物，并轻轻混匀；细胞培养基里面可以含有血清.细胞换液：转染24小时后对细胞进行正常换液，悬浮细胞转染过程中不用换液!分析结果：质粒DNA转染48-72小时后荧光检测转染效率，48-96小时检测mRNA或蛋白表达！若进行稳定表达细胞株的筛选，则在转染后24-48小时左右加入适量的药物进行筛选.
siRNA转染后9小时荧光检测转染效率，48-72小时检测mRNA或蛋白表达!转染操作示意图不同转染实验各成分推荐用量各品牌转染试剂类型与ZetaLife转染试剂的差异比较：Thermo品牌Lipo2000采用阳离子脂质体，需要更换培养基；特点是毒性大；转染前后需要更换培养基；可以转染质粒DNA、siRNA（效果差）!Thermo品牌Lipo3000采用阳离子脂质体，需要更换培养基；特点是相比Lip2000毒性略小；转染前后需要更换培养基；可以转染质粒DNA、siRNA（效果较差）!
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