注意事项:质粒DNA必须溶解于无菌双蒸水或超纯水,但不能溶解于提取试剂盒提供的Buffer!溶解于Buffer的质粒转染效率会下降80%左右,甚至会转染失败!质粒必须去除内毒素,内毒素对细胞将产生很大的细胞毒性,会导致转染效率下降70%-80%左右,甚至导致转染失败(推荐使用Qiagen、TIANGEN、Omega去内毒素质粒提取试剂盒)!复合物的制备过程中是绝不能用其他任何试剂对核酸或转染试剂进行稀释,只需将核酸和转染试剂两者按1:1比例直接混合,如果进行了稀释会导致转染失!
产品说明:产品名称AdvancedDNARNATransfectionReagent储存条件常温运输,4℃保存,可保存两年,拒绝反复冻融!包装规格货号:AD60002AD600050、AD60007AD600150、AD600500、AD601000规格:0。25ml、0。5ml、0.75ml、5ml、5ml、10ml使用说明:材料准备RNA浓度20uM/L质粒DNA浓度300ng-2ug/ul(注意:①溶解于无菌双蒸水或超纯水;②无内毒素)操作步骤提前1天接种细胞:细胞汇合度在60-80%左右,再进行转染.
siRNA转染后9小时荧光检测转染效率,48-72小时检测mRNA或蛋白表达。转染操作示意图不同转染实验各成分推荐用量各品牌转染试剂类型与ZetaLife转染试剂的差异比较:Thermo品牌Lipo2000采用阳离子脂质体,需要更换培养基;特点是毒性大;转染前后需要更换培养基;可以转染质粒DNA、siRNA(效果差)。Thermo品牌Lipo3000采用阳离子脂质体,需要更换培养基;特点是相比Lip2000毒性略小;转染前后需要更换培养基;可以转染质粒DNA、siRNA(效果较差).
深圳质粒DNA转染细胞转染试剂哪种好
▲ZetaLife转染试剂与传统转染试剂的效果对比ZetaLife转染试剂高效率转染难转染细胞难转染细胞,高效率转染案例分享:转染RAW267小鼠单核巨噬白血病细胞,使用AdvancedDNARNA转染试剂转染细胞:RAW267;转染体系:12孔板;转染时间:48h;转染细胞起始数量:电讯;转染试剂用量:电讯;转染试剂:ZetaLife,AdvancedDNARNA转染试剂;培养细胞使用血清:ZetaLife,Z7180FBS-500超低内毒胎牛血清转染人淋巴悬浮细胞,使用AdvancedDNARNA转染试剂转染细胞:人淋巴悬浮细胞;转染体系:12孔板;转染时间:48h;转染细胞起始数量:电讯;转染试剂用量:电讯;转染试剂:ZetaLife,AdvancedDNARNA转染试剂;培养细胞使用血清:ZetaLife,Z7010FBS-500胎牛血清转染NK细胞-自然杀伤悬浮细胞,使用AdvancedDNARNA转染试剂转染细胞:NK细胞-自然杀伤悬浮细胞;转染体系:12孔板;转染时间:48h;转染细胞起始数量:3*106;转染试剂用量:10ul;转染试剂:ZetaLife,AdvancedDNARNA转染试剂;培养细胞使用血清:ZetaLife,Z7010FBS-500胎牛血清转染H9C2大鼠心肌细胞,使用AdvancedDNARNA转染试剂转染细胞:H9C2大鼠心肌细胞;转染体系:12孔板;转染时间:48h;转染细胞起始数量:电讯;转染试剂用量:电讯;转染试剂:ZetaLife,AdvancedDNARNA转染试剂;培养细胞使用血清:ZetaLife,Z7181FBS-500胎牛血清转染A549细胞,使用AdvancedDNARNA转染试剂转染细胞:A549细胞;转染体系:12孔板;转染时间:48h;转染细胞起始数量:电讯;转染试剂用量:电讯;转染试剂:ZetaLife,AdvancedDNARNA转染试剂;培养细胞使用血清:ZetaLife,Z7186FBS-500胎牛血清转染N2a/Neuro-2a小鼠神经瘤母细胞,使用AdvancedDNARNA转染试剂转染细胞:N2a/Neuro-2a小鼠神经瘤母细胞;转染体系:12孔板;转染时间:48h;转染细胞起始数量:电讯;转染试剂用量:电讯;转染试剂:ZetaLife,AdvancedDNARNA转染试剂;培养细胞使用血清:ZetaLife,Z7181FBS-500胎牛血清ZetaLifeAdvancedDNARNA转染试剂系列价格:品牌:美国ZetaLife货号:AD6000250!
Thermo品牌RNAiMAX采用阳离子脂质体,需要更换培养基;特点是专门用来转RNA,对于细胞系的转染效率一般,对干细胞和神经原代细胞转染效果差!Promega品牌FuGENE6采用脂质混合体、特定缓冲液,需要更换培养基;特点是本质还是脂质体;只能转DNA;含有微量动物源成分,适用细胞种类因此受限;转染前后需要更换培养基;亲塑性,转染效率会因使用PE管(塑料管)而大打折扣.Roche品牌FuGENEHD采用脂质混合体、特定缓冲液,需要更换培养基;特点是本质还是脂质体;只能转DNA;亲塑性,转染效率会因使用PE管(塑料管)而大打折扣!
理想细胞转染方法,应该具有转染效率高、细胞毒性小等优点!病毒介导的转染技术,是目前转染效率较高的方法,同时具有细胞毒性很低的优势!但是,病毒转染方法的准备程序复杂,常常对细胞类型有很强的选择性,在一般实验室中很难普及。其它物理和化学介导的转染方法,则各有其特点!无论采用哪种转染技术,要获得较优的转染结果,可能都需要对转染条件进行优化!影响转染效率的因素很多,从细胞类型、细胞培养条件和细胞生长状态,到转染方法的操作细节,都需要考虑。