注意事项:质粒DNA必须溶解于无菌双蒸水或超纯水,但不能溶解于提取试剂盒提供的Buffer.溶解于Buffer的质粒转染效率会下降80%左右,甚至会转染失败。质粒必须去除内毒素,内毒素对细胞将产生很大的细胞毒性,会导致转染效率下降70%-80%左右,甚至导致转染失败(推荐使用Qiagen、TIANGEN、Omega去内毒素质粒提取试剂盒)。复合物的制备过程中是绝不能用其他任何试剂对核酸或转染试剂进行稀释,只需将核酸和转染试剂两者按1:1比例直接混合,如果进行了稀释会导致转染失.
▲ZetaLife转染试剂与传统转染试剂的效果对比ZetaLife转染试剂高效率转染难转染细胞难转染细胞,高效率转染案例分享:转染RAW267小鼠单核巨噬白血病细胞,使用AdvancedDNARNA转染试剂转染细胞:RAW267;转染体系:12孔板;转染时间:48h;转染细胞起始数量:电讯;转染试剂用量:电讯;转染试剂:ZetaLife,AdvancedDNARNA转染试剂;培养细胞使用血清:ZetaLife,Z7180FBS-500超低内毒胎牛血清转染人淋巴悬浮细胞,使用AdvancedDNARNA转染试剂转染细胞:人淋巴悬浮细胞;转染体系:12孔板;转染时间:48h;转染细胞起始数量:电讯;转染试剂用量:电讯;转染试剂:ZetaLife,AdvancedDNARNA转染试剂;培养细胞使用血清:ZetaLife,Z7010FBS-500胎牛血清转染NK细胞-自然杀伤悬浮细胞,使用AdvancedDNARNA转染试剂转染细胞:NK细胞-自然杀伤悬浮细胞;转染体系:12孔板;转染时间:48h;转染细胞起始数量:3*106;转染试剂用量:10ul;转染试剂:ZetaLife,AdvancedDNARNA转染试剂;培养细胞使用血清:ZetaLife,Z7010FBS-500胎牛血清转染H9C2大鼠心肌细胞,使用AdvancedDNARNA转染试剂转染细胞:H9C2大鼠心肌细胞;转染体系:12孔板;转染时间:48h;转染细胞起始数量:电讯;转染试剂用量:电讯;转染试剂:ZetaLife,AdvancedDNARNA转染试剂;培养细胞使用血清:ZetaLife,Z7181FBS-500胎牛血清转染A549细胞,使用AdvancedDNARNA转染试剂转染细胞:A549细胞;转染体系:12孔板;转染时间:48h;转染细胞起始数量:电讯;转染试剂用量:电讯;转染试剂:ZetaLife,AdvancedDNARNA转染试剂;培养细胞使用血清:ZetaLife,Z7186FBS-500胎牛血清转染N2a/Neuro-2a小鼠神经瘤母细胞,使用AdvancedDNARNA转染试剂转染细胞:N2a/Neuro-2a小鼠神经瘤母细胞;转染体系:12孔板;转染时间:48h;转染细胞起始数量:电讯;转染试剂用量:电讯;转染试剂:ZetaLife,AdvancedDNARNA转染试剂;培养细胞使用血清:ZetaLife,Z7181FBS-500胎牛血清ZetaLifeAdvancedDNARNA转染试剂系列价格:品牌:美国ZetaLife货号:AD6000250.
北京悬浮细胞转染试剂
核酸复合物制备:将核酸与转染试剂按照1:1关系直接混合,用移液器吹吸10-15次混匀,室温静止10-15分钟!在细胞培养基中加入核酸复合物:根据参考用量在细胞中加入核酸复合物,并轻轻混匀;细胞培养基里面可以含有血清.细胞换液:转染24小时后对细胞进行正常换液,悬浮细胞转染过程中不用换液!分析结果:质粒DNA转染48-72小时后荧光检测转染效率,48-96小时检测mRNA或蛋白表达!若进行稳定表达细胞株的筛选,则在转染后24-48小时左右加入适量的药物进行筛选。
siRNA转染后9小时荧光检测转染效率,48-72小时检测mRNA或蛋白表达。转染操作示意图不同转染实验各成分推荐用量各品牌转染试剂类型与ZetaLife转染试剂的差异比较:Thermo品牌Lipo2000采用阳离子脂质体,需要更换培养基;特点是毒性大;转染前后需要更换培养基;可以转染质粒DNA、siRNA(效果差).Thermo品牌Lipo3000采用阳离子脂质体,需要更换培养基;特点是相比Lip2000毒性略小;转染前后需要更换培养基;可以转染质粒DNA、siRNA(效果较差)!
25ml/1590元品牌:美国ZetaLife货号:AD6000500!5ml/2390元品牌:美国ZetaLife货号:AD6000750。75ml/2890元品牌:美国ZetaLife货号:AD6001505ml/4490元品牌:美国ZetaLife货号:AD6005005ml/14580元品牌:美国ZetaLife货号:AD60100010ml/27480元细胞转染简介:随着分子生物学和细胞生物学研究的不断发展,转染已经成为研究和控制真核细胞基因功能的常规工具.
产品说明:产品名称AdvancedDNARNATransfectionReagent储存条件常温运输,4℃保存,可保存两年,拒绝反复冻融!包装规格货号:AD60002AD600050、AD60007AD600150、AD600500、AD601000规格:0!25ml、0.5ml、0。75ml、5ml、5ml、10ml使用说明:材料准备RNA浓度20uM/L质粒DNA浓度300ng-2ug/ul(注意:①溶解于无菌双蒸水或超纯水;②无内毒素)操作步骤提前1天接种细胞:细胞汇合度在60-80%左右,再进行转染。
ZetaLifeAdvanced系列高效率DNA、RNA转染试剂介绍:目前,一种新型的转染方式可实现高效率转染!美国ZetaLife公司推出ZetaLife转染试剂是全球首创进入细胞后可以被代谢的新型小分子多肽转染试剂,对细胞无毒性,不易出现细胞死亡,不激活细胞免疫机制!ZetaLife转染试剂采用的是新型小分子多肽材料,其特点是非脂质体材料,大小是80nm左右,由于形状是圆形的,不会对细胞有物理性损伤,材料表面有特异性结合接头,只特异性识别DNA、RNA,对血清成分(如细胞因子、蛋白、内毒素等)不识别也不结合;特异性接头与核酸形成转染复合物,转染复合物通过细胞主动吞噬进入细胞,进入细胞后可以被代谢的新型小分子多肽材料,对细胞无内毒素影响,不易出现细胞死亡.