理想细胞转染方法,应该具有转染效率高、细胞毒性小等优点!病毒介导的转染技术,是目前转染效率较高的方法,同时具有细胞毒性很低的优势。但是,病毒转染方法的准备程序复杂,常常对细胞类型有很强的选择性,在一般实验室中很难普及!其它物理和化学介导的转染方法,则各有其特点。无论采用哪种转染技术,要获得较优的转染结果,可能都需要对转染条件进行优化。影响转染效率的因素很多,从细胞类型、细胞培养条件和细胞生长状态,到转染方法的操作细节,都需要考虑!
Thermo品牌RNAiMAX采用阳离子脂质体,需要更换培养基;特点是专门用来转RNA,对于细胞系的转染效率一般,对干细胞和神经原代细胞转染效果差.Promega品牌FuGENE6采用脂质混合体、特定缓冲液,需要更换培养基;特点是本质还是脂质体;只能转DNA;含有微量动物源成分,适用细胞种类因此受限;转染前后需要更换培养基;亲塑性,转染效率会因使用PE管(塑料管)而大打折扣!Roche品牌FuGENEHD采用脂质混合体、特定缓冲液,需要更换培养基;特点是本质还是脂质体;只能转DNA;亲塑性,转染效率会因使用PE管(塑料管)而大打折扣!
siRNA转染后9小时荧光检测转染效率,48-72小时检测mRNA或蛋白表达。转染操作示意图不同转染实验各成分推荐用量各品牌转染试剂类型与ZetaLife转染试剂的差异比较:Thermo品牌Lipo2000采用阳离子脂质体,需要更换培养基;特点是毒性大;转染前后需要更换培养基;可以转染质粒DNA、siRNA(效果差)!Thermo品牌Lipo3000采用阳离子脂质体,需要更换培养基;特点是相比Lip2000毒性略小;转染前后需要更换培养基;可以转染质粒DNA、siRNA(效果较差)!
核酸复合物制备:将核酸与转染试剂按照1:1关系直接混合,用移液器吹吸10-15次混匀,室温静止10-15分钟.在细胞培养基中加入核酸复合物:根据参考用量在细胞中加入核酸复合物,并轻轻混匀;细胞培养基里面可以含有血清.细胞换液:转染24小时后对细胞进行正常换液,悬浮细胞转染过程中不用换液!分析结果:质粒DNA转染48-72小时后荧光检测转染效率,48-96小时检测mRNA或蛋白表达!若进行稳定表达细胞株的筛选,则在转染后24-48小时左右加入适量的药物进行筛选!
ZetaLife品牌Advanced系列采用新型工业材料,不需要更换培养基;特点是不需要换液,无细胞毒性,转染效率高,适用细胞种类多,可转染质粒DNA、siRNA及小动物活体转染!ZetaLife转染试剂的优势:活体转染ZetaLife公司Advanced系列转染试剂是全球独一个可以做小动物活体转染的转染试剂;脂质体转染试剂进入动物体后会迅速被分解掉,在肺组织内累积,诱发强烈的抗炎反应,具有毒性,因此不能用于小动物活体转染;而ZetaLifeAdvanced系列转染试剂属于新型工业材料,进入小动物皮下,不会被分解掉,能够进入细胞中发挥作用。
北京siRNA转染细胞转染试剂推荐
如果您看到这段话,说明您对我们悬浮细胞转染试剂感兴趣,不要犹豫,给我们一个机会,也给自己一个机会。 拿起手机来拨打我们的电话。华伟等待着您的每一次致电:19126518388 让深圳市安培生物科技有限公司为您服务, 我们在深圳市宝安区新安街道宝民社区创业二路5号建设银行楼创业二路5-1这里等您。
产品说明:产品名称AdvancedDNARNATransfectionReagent储存条件常温运输,4℃保存,可保存两年,拒绝反复冻融.包装规格货号:AD60002AD600050、AD60007AD600150、AD600500、AD601000规格:0!25ml、0.5ml、0!75ml、5ml、5ml、10ml使用说明:材料准备RNA浓度20uM/L质粒DNA浓度300ng-2ug/ul(注意:①溶解于无菌双蒸水或超纯水;②无内毒素)操作步骤提前1天接种细胞:细胞汇合度在60-80%左右,再进行转染!
ZetaLife转染试剂可转染极度难转染的免疫细胞、悬浮细胞,如:T细胞、NK细胞、人淋巴细胞、THP-1等;可高效率转染siRNA到任何哺乳动物细胞;用于将DNA和siRNA转染到真核细胞系和各种原代细胞中!ZetaLife转染试剂突出表现:ZetaLife多肽小分子转染试剂的尺寸大小是传统脂质体转染试剂体积的1/10;本转染试剂是通过细胞内㖔和细胞主动吸收进入细胞;本转染试剂进入后对细胞膜无物理性损伤,不易出现细胞变形,保持高的细胞活力;不激活细胞表面或细胞体内marker;可反映真实的细胞通路蛋白原始数据;可转染免疫细胞、悬浮细胞等!