但对密度不同、大小类似的物质则不易分离.蔗糖梯度是一种常用的介质!用不同浓度的蔗糖溶液(5%-60%)配成梯度,用于梯度离心!再分别进行收集处于不同区带里的各个组份.沉降平衡离心这是静力学的方法。在离心管中形成一个液体梯度,在离心时各组份以不同的速度下沉,但最终停留在与自己相同的密度中,形成一条狭窄的平衡带,并保持相对的稳定.为了使样品所有组份都能达到它们的平衡位置,需要长时间离心!这种方法适用于分离大小相似但密度不同的物质,如核酸的分离!
一般说,离心机转速在30000r/min以上的称为超速离心.离心技术,特别是超速离心技术是分子生物学、生物化学研究和工业生产中不可缺少的手段.1924年T!Svedberg和Rinde研制出世界上第yi台涡轮超速离心机以来,发展非常迅速,已广泛地应用到科学研究和生产的各个领域!离心机转头zui高转速已达150000r/min(贝克曼OptimaMAX-XP,2010年数据),zui大离心力达1019000Xg(贝克曼OptimaMAX-XP,2010年数据)。
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两类离心机由于用途不同,故其主要结构也有差异!通常所使用的离心机根据转子转速大小的不同可分为普通离心机、高速离心机和超速离心机三类。离心方法差速离心这种方法是选择不同转速的离心,分别分离各个不同组分!例如先用低速沉降大颗粒和上清液,在高速离心上清沉降中等颗粒,最后超速离心上清沉降小颗粒.采用逐级提高离心力分离上情液的方法,把不同大小的颗粒分开。这种方法比较简单,方便!分离的组份沉到管底,因此可以迅速浓缩所要的组份,减少体积!
离心技术,是蛋白质、酶、核酸及细胞亚组分分离的zui常用的方法之一,也是生化实验室中常用的分离、纯化或澄清的方法.尤其是超速冷冻离心已经成为研究生物大分子实验室中的常用技术方法!离心机(centrifuge)是实施离心技术的装置。离心机的种类很多,按照使用目的,可两类,即制备型离心机和分析型离心机。前者主要用于分离生物材料,每次分离样品的容量比较大,后者则主要用于研究纯品大分子物质,包括某些颗粒体如核蛋白体等物质的性质,每次分析的样品容量很小,根据待测物质在离心场中的行为(可用离心机中的光学系统连续地监测),能推断其纯度、形状和相对分子质量等性质!
另外,通常30000rpm以上的才叫超速离心,上面名片说的不通用,但是我在那里改不了,所以写这儿!(蝶花公子仅改此段,其余再论)离心机作为一种手段,具有许多优点!例如,超速离心可在低温下操作,保护了生物大分子的活性!制备型的离心机负载量大,一次可分离提纯几克样品,比层析、电泳上的样品量大得多.分析离心机不仅可测物质的分子量,还可检验物质的纯度、构象、沉降系数等.因此离心技术在生物学研究中占有重要的地位,是分离、纯化细胞、蛋白、核酸、酶和进行病毒分离的zui方便有效的工具。
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但回收率和纯度是有矛盾的,要提高回收率,势必提高转速或延长离心时间,这样大小相近的颗粒也会沉到管底!因此该法多用于粗提纯或初步浓缩样品.速度区带(或速度梯度)离心本法是将样品放在一个连续的密度梯度液体上,通过离心,大颗粒沉降快,小颗粒沉降慢!经过一段时间,相同的颗粒就在同一深度形成一条带子,因此把各种组份分开来。它适用于分离密度相同、而大小不同的物质,如不同的蛋白质组份密度都差不多,但分子量不一样,用本法很容易将其分开.